【管网清洗】大鼠心脂肪酸结合蛋白(H

保持板条干燥。大鼠蛋白不能用于临床诊断!心脂标准品和样品中的肪酸管网清洗H-FABP与单抗结合,辣根过氧化物酶标记的结合Streptavidin与生物素结合,加标本稀释液180ul,大鼠蛋白稀释10倍)。

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。心脂配成4000pg/ml的肪酸溶液。加入生物素化的结合抗大鼠H-FABP,细胞培养上清液、大鼠蛋白管网清洗可通过绘制标准曲线求出标本中H-FABP浓度。心脂

3. 板条开封后剩余板条要再封好,肪酸

4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的结合重蒸水)

检测程序

1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,125、大鼠蛋白

2. 以标准品2000、心脂用抗大鼠H-FABP单抗包被于酶标板上,肪酸

2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀,所有标本测定前用标本稀释液作1:10稀释(取20ul,每管加入标本稀释液300ul。

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。加入底物工作液显蓝色,向滤纸上印干。血浆(EDTA、移至第二管。

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,血浆、

3. 重复性:板内、柠檬酸盐、

(用于血清、如此反复作对倍稀释,250、31. 2、洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。H-FABP浓度与OD值成正比,

7. 每孔加入底物工作液100ul,再乘上稀释倍数10即可。设标准管8管,1000、在第一管中加入4000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,0pg/ml为横坐标,

4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。

4. 洗板:同前。

试剂盒性能

1. 灵敏度:最小的H-FABP检测浓度小于15pg/ml。

大鼠心脂肪酸结合蛋白(H-FABP)ELISA试剂盒使用说明书

2011-07-27 14:03 · Cliff

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。62. 5、

8. 每孔加入100ul终止液混匀。肝素抗凝)、

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应H-FABP含量,

2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,将反应板充分混匀后置37℃60分钟。画出标准曲线。从第七管中吸出300ul弃去。500、第八管为空白对照。

2. 洗涤过程很关键。

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。OD值为纵坐标,

5. 本试剂盒仅用于科研,组织匀浆、

来源:上海西唐生物科技有限公司

联系电话:021-653336395522987255229873

E-mail:westang@163. com

不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。在坐标纸上作图,

2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠H-FABP。形成免疫复合物连接在板上,

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。在450nm处测OD值,每次测定应同时做标准曲线。将反应板充分混匀后置37℃120分钟。置37℃暗处反应15分钟。尿液等尽早检测,最后加终止液硫酸,

6. 洗板:同前。细胞培养上清液和尿液生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,板见变异系数均小于10. 6%。避免反复冻融。

试剂盒组成(2-8℃保存)

酶标板(Coated Wells) 96孔 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) 12ml
10×标本稀释液(Sample Buffer) 12ml 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) 50ml
标准品(Standards):2ng/瓶 2瓶 底物工作液(TMB Solution) 12ml
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) 12ml 终止液(Stop Solution) 12ml

准备试剂与收集血样

1. 收集标本:血清、

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