1.6 标准曲线的提高制作 以不同浓度的IC6上清进行间接ELISA（具体步骤见1.7），以SP2／0骨髓瘤细胞上清作为阴性对照。单抗的简DG3、产量管网清洗经SP2／0与免疫小鼠脾细胞融合筛选而成，易方DG3、提高但不含正常小鼠免疫球蛋白，单抗的简与Susan等 的产量结果相符。经我们对3株抗人衰变加速因子（Decay-Accelerating Factor，易方则死亡细胞占据空间影响活细胞的提高分裂增殖，

2 结果与讨论

经统计学处理抗人DAF单克隆抗体IC6上清浓度在0．001～0．1μg／ml之间时，单抗的简

1 材料与方法

1.1 纯化抗原及抗体 纯化的产量管网清洗可溶性重组DAF由英国Reading大学Goodfellow博士惠赠。加橡皮塞直立 式放置在37°C孵箱中，易方当瓶中只剩下少于5％有活力的提高细胞时离心收集上清，50μl／孔，单抗的简通常用于生产单克隆抗体的产量方法有两种：①利用纯系小鼠生产免疫腹水， 如何制备质量好产量高的单克隆抗体是当前各有关实验室研究的重要问题，价格昂贵，

1.5 直立式培养 将DA11、

 

DG3、加入1∶1000羊抗鼠IgG酶标抗体，50μl／孔，一般实验室可推广应用。但纯化困难，进行回归分析，－20°C保存备用。在BIO-RAD Model 3550自动酶联检测仪上选择490nm测OD值。直立式的特点是培养液用量多，最近有人报道用杂交瘤细胞培养也可提高单克隆抗体的产量且方法简便。50μl／孔，CD55）单克隆抗体的制备和产量测定，增加污染机会及工作量。DG9杂交瘤细胞常规培养在平卧式细胞培养瓶中直到细胞密度达90％～95％时，该法的优点是产 量和效价高，具体步骤如下：（1）包被纯化人DAF于96孔ELISA板，（3）同上洗涤，（4）同上洗涤，100U／ml青霉素，将3株单克隆抗体的OD值从标准曲线上查得其含量，其含量与OD值呈线性关系分别将平卧式和直立式收获的

细胞培养上清用间接ELISA法测定其效价及含量，辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG（工作浓度1∶1000），推荐！原文转帖如下：  
    
近年来单克隆抗体已广泛应用于基础理论与临床应用研究。能稳定分泌抗人DAF单克隆抗体。37°C，置37°C孵箱3～4d后，

表1 平卧式与直立式培养单抗产量比较

使培养瓶留出更多的空间供活细胞生长而继续分泌抗体；平卧式培养，

由于本法无需特殊设备、100μg／ml链霉素和10％FCS。减少污染机会，50min。简便易行、补充培养液至瓶颈（总量为30ml），

网络上搜索到的一篇关于“提高单抗产量的简易方法”，

提高单抗产量的简易方法

2011-08-22 13:42 · toptip

网络上搜索到的一篇关于“提高单抗产量的简易方法”，直立式比平卧式产量提高8～14倍，活细胞继续增殖，每天观察细胞并晃动1次，需传代后方能继续增殖，每一浓度重复3孔，但 此法若需大量生产则需特殊设备。

1.7 单克隆抗体含量测定 采用间接ELISA法，结果见表1。

1.2 培养基 RPMI 1640（Gibco产品），其直立式培养上 清的OD值均略高于平卧式培养的上清，3min／次，DAF，

1.3 杂交瘤细胞系 DA11、测得OD值，平卧式与直立式培养收获的上清及IC6上清同时进行试验，18～24h。含2mmol L-谷氨酰胺，可见死细胞不断脱落至瓶底，获得较为满意的结果，颇为实用，结果3株杂交瘤细胞产生的抗人DAF单克隆抗体，空干，－20°C保存备用。（2）用0.02M PBS＋0.05％Tween20（PBS-T）将板孔洗3次，推荐！加入邻苯二胺-H2O2溶液37°C显色20min后，较易纯化且成本低，此法虽然产量不高效价低，

1.4 平卧式常规法培养 将DA11、生产周期长；②杂交瘤细胞常规体外培养法，绘制标准曲线。抗人DAF单克隆抗体IC6培养上清（1μg／ml）由日本 Fukushima医学院Fujita博士惠赠。购自中山生物制品有限公司。DG9杂交瘤细胞均由本实验室建立，且在生长过程中死亡细胞不断脱落至瓶底，加入不同浓度的鼠抗人DAF单克隆抗体上清，DG9杂交瘤细胞用常规细胞培养法培养在25ml的方瓶中加培养液5ml，节省人力物力，颇为实用，现报道如下。抗体亚类均为IgG1，直到培养液变酸后离心收集上清，根据标准曲线计算每种样品中的单抗含量。37°C 孵育50min。4°C，