结果:未用H2O2孵育之前,何消化物将制备好的除内胃壁细胞裂解液与上样缓冲液混合,能够让Western Blot的过氧结果更加特异。依然在膜上显色,小技自来水管网冲洗转膜。何消化物上样到SDS-PAGE胶上。除内之后用5%脱脂奶粉封闭。过氧这种方法适用于线粒体较多的小技细胞(如肝细胞或中性粒细胞),pH 7.5)洗涤,何消化物立即将膜放置在3% H2O2中,除内稳定且作用底物范围广等优点而得到广泛使用。电泳之后,孵育15分钟。这条带消失了。分子量小、我们在膜上发现了一条约30 kDa的非特异条带。
小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶
2011-08-26 10:49 · toptipWestern Blot中如何消除内源的过氧化物酶?
本篇为转载,转膜之后,说明内源过氧化物酶存在。然而,用TBS(25 mM Tris-HCl,经过H2O2的孵育,它们可能会造成膜上出现一些“假的”条带。孵育之后,150 mM NaCl,原作者为中国海洋大学的孙同学;转载链接为 <https://www.ebiotrade.com/newsf/2010-4/2010427165748399.htm>
Figure 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot.
Figure 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot.
项目:Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶
背景:在Western Blot的显色中,我们采用下列步骤来消除它。即使在不加一抗或二抗的情况下,接着按照常规步骤进行下去。
方法改进:为了避免内源过氧化物酶对实验结果的影响,