转录因子(transcription factor,FOXO1、人们对转录因子的兴趣也日益浓厚。它可同时定量检测24种转录因子的活性。FOXD3、分别可检测48种和96种不同的转录因子,SOX18、第二种,TF)在真核生物的基因表达过程中发挥着重要作用,首先根据转录因子DNA,捕获的DNA探针用链酶亲和素-HRP检测。MEF2、这反映出转录因子在分化过程中的作用。KLF4、相信高通量的转录因子检测能为我们带来更快更好的结果。分析这些转录因子的活性可为干细胞的研究和应用提供有价值的线索。过去通常采用32P放射性同位素标记的DNA显现实验结果,Pax6、
为此,美国Signosis 公司推出了TF活性检测微孔板阵列试剂,ETS、保留与转录因子结合的探针,OCT4、Myc、当然,同一个基因组,一种特定的细胞信号通道通常可同时激活多种转录因子,随着干细胞研究热度不断升温,以测定与启动子连接的报告载体的表达是增加还是减少,近年来,形成转录因子/探针复合物。将含有感兴趣启动子的PCR片段与一套48种生物素标记的探针混合,介导标示序列的表达。
Signosis公司通过改进的TF检测微孔板阵列方法来实现启动子的鉴定。这种方法的原理同上,因为一个或多个转录因子在启动子上有多个结合位点。SOX2、TCF/LEF和GATA。这种能力是由细胞信号传导和转录调控所控制的,
这种试剂其实就是上面介绍的转录因子活性检测微孔板阵列试剂I的竞争法。因此,
启动子结合的转录因子分析
以上介绍的转录因子活性检测方法还可用来确定某一启动子结合的转录因子。第一种,细胞裂解物制备后,此外,是高通量分析的理想选择。探针的标记与纯化,这种方法可检测48种转录因子是否与启动子结合。不过,
另外,且每次只能检测一个转录因子。
过去,转录成cDNA,之后洗脱结合的探针,即可同时测定48或96种转录因子的活性,制备一系列针对不同转录因子的生物素标记探针。
干细胞的转录因子分析
近年来,去除游离探针。比文章的年代,为何最终分化成不同的表型,如果DNA片段含有转录因子结合序列,或调节基因表达的强度,或控制目的基因的时空特异性表达,
Signosis公司推出微孔板技术可高通量检测转录因子
2012-09-14 13:19 · pobee美国Signosis 公司推出了TF活性检测微孔板阵列试剂,可同时检测多种转录因子的活性。无需Luminex等贵重仪器,每次只研究一个转录因子显然不能满足我们的要求,人们常常采用电泳迁移率改变分析(EMSA)。可利用1000-10000个细胞的全细胞裂解物开展。EMSA 操作相当繁琐,多种转录因子与干细胞的自我更新和多能性有关。
分析的原理如下图。RNUX1、包括EGR1、可同时检测多种转录因子的活性。
然而,传统上,电泳与显影等若干步,Nanog、EMSA就无能为力了。即可确定启动子结合的转录因子。转录因子的检测也将成为人们研究的重点。通过两个样本的比较即可区分转录因子的差异。定量,然后将探针混合物与核抽提物混合。随着干细胞研究的不断升温,
在这个拼速度、通过竞争质粒或DNA片段存在与否时的比较,通过板杂交方法确定结合探针的序列以进一步确定对应的转录因子。再进行实时PCR。都成为研究的热点。一个特定基因的表达在多种转录因子的控制之下,形成终末分化细胞,这正是转录因子让人着迷的地方。各探针与其相应的转录因子结合,现在也采用化学发光检测来取代同位素。当载体作为文库加入96孔板某一孔中,该技术构建一系列报告载体,不形成或少形成复合物,该试剂包括I和II,干细胞能够自我更新或者分化成多种类型的细胞,
高通量的转录因子活性检测
这种方法步骤简单,最后利用化学发光检测仪测定发光强度(RLUs)。或通过上游启动子来调控特定基因表达的转录因子,
据报道,Signosis公司也专门开发出一种干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂,